Monitoreo de Salmonella: Método Tradicional y Pruebas Rápidas de Tamizaje ó Screening
¿Cuáles son los pasos que se usan para el análisis microbiológico tradicional? Si usted es un lector de México, lo puede encontrar en un apéndice de la Norma 210 ( NOM-210-SSA1-2014, Productos y servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos) Dirección web: http://www.dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=5398468&fecha=26/06/2015).
Si es un lector hispano parlante de Latinoamérica, puede referirse a la ISO para Salmonella ó a la Sección del BAM de la FDA en los Estados Unidos. Las direcciones de acceso son:
Acorde a la ISO:
Acorde al Manual de Bacteriología Analìtica (BAM) de la Administración de Drogas y Alimentos de Estados Unidos (FDA-USA):
La metodología involucra de 5 a 6 pasos:
1) Pre-enriquecimiento
2) Enriquecimiento Selectivo
3) Aislamiento Diferencial en Placa de Agar
4) Pruebas Bioquímicas Presuntivas
5) Pruebas Bioquímicas Confirmativas
6) Confirmación por Serología (y en algunos casos por PCR)
Cada uno de estos pasos demora de 24 a 48 horas, razón por la cual el tiempo para poder tener resultados para descartar si el microorganismo está realmente presente es al menos de 4 a 5 días.
Hoy por hoy, cada día menos empresas pueden estar esperando de 5 a 7 días para poder liberar lotes de materias primas ó productos terminados por los altos costos que esto implica y su enfoque hacia la gestión de la calidad y el control de puntos críticos busca que todos los lotes queden libres de contaminantes patogénicos como en el caso de Salmonella, para poder liberar basados en el historial estadístico y/o en el uso de indicadores como Enterobacterias ó E.coli que pueden obtenerse en 24 horas como máximo.
Escribo estas líneas en Enero de 2018 tras casi 22 años de estar implicado en la comercialización de ensayos rápidos para screening ó tamizaje de microorganismos patógenos como Salmonella. Durante este período de tiempo, hemos tenido la oportunidad de platicar con cientos de usuarios y personal de laboratorios de microbiologìa privados, públicos y de autoridades sanitarias mexicanas estatales y federales y la gran duda que siempre se tiene es hasta dónde se pueden usar las pruebas rápidas para analizar bacterias como Salmonella.
La respuesta es muy sencilla y las mismas autoridades sanitarias, empezando por las de EUA, además de las europeas (ISO, AFNOR), canadienses (Health Canada) y muchos otras es como sigue:
" El ensayo rápido, siempre y cuando haya sido validado para la matriz que quiera analizar (ó alguna que forme parte del grupo como Lácteos, carnes rojas, vegetales, huevo, granos, superficies inertes, etc.) y que tenga la confiabilidad mínima necesaria para ser aprobado como Método Oficial OMA-AOAC ó AFNOR ó MicroVAL ó ISO ó similares, puede usarse para descartar las muestras negativas a la presencia del patógeno en la mitad, tercera o cuarta parte del tiempo que demora el método tradicional y para detectar las muestras presunto positivas de manera rápida, para evitar enviarlas al mercado ó meterlas al proceso de producción sin confirmar plenamente que el patógeno pueda aislarse por los pasos del método tradicional autorizado en su país".
Ese es el enfoque correcto de una prueba de screening o tamizaje. Las mejores son las que usan los mismos medios de pre-enriquecimiento del método tradicional porque en caso de encontrar un presunto positivo, no es necesario regresar hasta la muestra original y se continúa con el paso 3 de manera clásica (Aislamiento Diferencial en Placa) en la mayoría de ellos.
¿De qué manera se logra lo anterior? El fabricante busca generar un conteo de un rango entre 10 a la 6 por gramo, para poder detectar alguna estructura a nivel inmunológico (del interior ó de la membrana celular de las bacterias) lo cual logra tras períodos entre 24 y 48 horas dependiendo de la metodología y si está alineada o no con los pasos de la Norma para el patógeno que está buscando y casi todos los ensayos existentes usan el formato de Flujo Lateral (como las pruebas de embarazo), el formato de ELISA (Enzyme Inmuno Linked Assay) ó más recientemente técnicas que buscan el ADN, el RNA ó estructuras moleculares genéticas (el ensayo que más fuerza ha crecido en la última década es la técnica de PCR en tiempo Real ó Reacción en Cadena de la Polimerasa por las siglas en inglés; por la razón de que es la única metodología con alta confiabilidad que ha logrado reducir los tiempos para detección de patógenos como Salmonella hasta a 12 horas ya contando el pre-enriquecimiento).
En las próximas entradas procuraremos estar describiendo con más detalle el funcionamiento de varios de los ensayos rápidos que se usan para análisis de Salmonella.
Si desea información detallada de cómo implementar una técnica rápida de Salmonella, escriba a luis_quintanilla@hotmail.com y con gusto le podemos asesorar si está en México ó canalizarle con una empresa de respeto que le pueda ayudar en Latinoamérica.
Por ahora, hacemos una pausa corta.
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